Fernán Gómez
Es el Comendador Mayor de la Orden de Calatrava. Su papel es protagónico. Tiene uno de los cargos más importantes en la Orden, por debajo del Meastre. Ejerce su poder en Fuenteovejuna con tiranía. Actúa motivado por el deseo de satisfacer sus deseos personales y no le interesa el bien comunitario. Es arrogante, soberbio y perverso. Abusa de las mujeres y las amenaza, y castiga injustamente a sus súbditos. Lope lo presenta desde el inicio como un hipócrita. Cree que, por el hecho pertenecer a la nobleza y a diferencia de la gente del pueblo, tiene honor. Sin embargo, también carece de este atributo, ya que sus actos son indignos y traiciona, además, a los Reyes Católicos. Por su abuso de poder, el pueblo de Fuenteovejuna decide matarlo.
Rodrigo Téllez Girón
Es el Maestre de la Orden de Calatrava. Es la autoridad máxima de la orden, pero es joven e inexperto, por lo que el Comendador puede manipularlo. Sin embargo, hacia el final de la obra se muestra humilde y arrepentido, frente a los Reyes Católicos, por haberse dejado influenciar por el Comendador y haberlos traicionado con la toma de Ciudad Real.
Laurencia
Aldeana de Fuenteovejuna. Es la hija del alcalde Esteban. Es firme en sus convicciones, valiente y audaz. Cuida su honra. Al principio es escéptica respecto al amor, pero a medida que avanza la obra se enamora cada vez más de Frondoso, quien también la ama. El Comendador la persigue lascivamente y la amenaza, sin conseguir corromper nunca la conducta de ella. Laurencia tiene un papel importante en Fuenteovejuna (se convierte en la promotora del levantamiento popular), lo que no es habitual en los papeles femeninos de las comedias de la época.
Frondoso
Aldeano de Fuenteovejuna. Es valiente y honrado. Está enamorado de Laurencia y le demuestra su amor, proponiéndole casamiento, rechazando su dote y defendiéndola con valentía, también, de los acosos del Comendador. Su nombre evoca el mundo idílico de los pastores y el campo.
Mengo
Aldeano de Fuenteovejuna. Es un hombre valiente y honrado. Al principio de la obra defiende la idea de que no existe el amor más que en la forma de amor propio. Sin embargo, a lo largo de la obra demuestra tener amor por su comunidad, a la que se une por una causa común. Tras ser azotado por los soldados del Comendador, se vuelve un poco temeroso pero, cuando es torturado por el juez para que delate al culpable de la muerte del Comendador, se comporta con el mismo estoicismo que el resto de los habitantes.
Barrildo
Aldeano de Fuenteovejuna. Es un hombre honrado, con opiniones propias. Sostiene una idea platónica del amor.
Leonelo
Aldeano de Fuenteovejuna. Es intelectual: ha estudiado en la Universidad de Salamanca. Probablemente Lope incluya a este personaje para mostrar que en el pueblo hay un estudiante universitario, y que entre sus habitantes circula, por tanto, el pensamiento culto.
Pascuala
Aldeana de Fuenteovejuna. Es una mujer honrada y sensata. Desconfía de los hombres.
Jacinta
Aldeana de Fuenteovejuna. Es una mujer honrada. El Comendador la persigue con deseos lascivos. Ella pide socorro pero no consigue escapar del tirano. El Comendador, ofendido con ella, por sentirse rechazado, la entrega a sus soldados para que la violen.
Esteban
Es el el alcade de Fuenteovejuna y padre de Laurencia. Es un hombre honrado, justo, moderado y valiente. No cree en las supersticiones de la astrología. Pide la opinión de su hija antes de dar su mano a Frondoso. Aunque defiende a su hija cuando el Comendador le pide que la reprenda por no haber cedido a sus deseos sexuales, ella le recrimina no haber actuado cuando el aquel la raptó.
Alonso
Es alcalde de Fuenteovejuna junto con Esteban. A veces aparece como "Alcalde" y otras como "Alonso". Es valiente y juicioso. Al principio de la obra se muestra generoso con el Comendador, pero luego su actitud se vuelve desafiante.
Juan Rojo
Es regidor de Fuenteovejuna y tío de Laurencia. En sus opiniones muestra prudencia y conocimiento político. Confía en la autoridad de los Reyes Católicos para poner fin a los abusos del Comendador.
Cuadrado
Es regidor de Fuenteovejuna. Aparece nombrado como "Regidor". Habla con valentía y dignidad.
Flores
Ayudante del Comendador. Cumple con sus órdenes y funciona como su alcahuete. Tiene opiniones acertadas que comparte con su señor, sin ser escuchado. Cuando el pueblo de Fuenteovejuna se alza contra el Comendador él logra huir, dirigiéndose luego a los Reyes Católicos para darles una versión falsa de los hechos.
Ortuño
Ayudante del Comendador. Es sumiso y cumple sus ordenes.
Cimbranos
Es un soldado del Comendador, elocuente y persuasivo. Aparece nombrado como "Soldado".
Isabel I
Reina de Castilla. Es la esposa de Fernando de Aragón. Es juiciosa y da sus opiniones en la corte. Demuestra tener conocimientos políticos y militares. Los aldeanos confían en la autoridad de ella y de su marido.
Fernando de Aragón
Es el rey de Aragón y de Castilla. Es la autoridad máxima en la tierra, pues su poder está solo por debajo del de Dios, según la concepción de la época y tal como lo expresa Esteban (v 1702). Es juicioso, sabe escuchar y también perdonar.
Manrique
Es informante y consejero de los Reyes Católicos. Da consejos sabios y prudentes. Los reyes confían en él.
Regidores de Ciudad Real
Regidores 1 y 2. Informan a los Reyes Católicos sobre la situación de Ciudad Real durante la guerra con la Orden de Calatrava.
Juez
Es el Juez al servicio de los Reyes Católicos. Es diligente en su tarea de interrogar a los habitantes de Fuenteovejuna.
Pueblo de Fuenteovejuna
El pueblo de Fuenteovejuna en su conjunto se presenta en la obra como un personaje colectivo. Todos son honrados, juiciosos, sencillos y actúan con amor comunitario. El pueblo en su conjunto es víctima del Comendador, por eso se levantan en conjunto contra su autoridad. Asimismo, al ser interrogados por el juez, señalan, como único responsable del asesinato del Comendador, a Fuenteovejuna en su totalidad.
