El narrador
Poco se sabe sobre el narrador por fuera de los hechos que ocurren en la casa Usher. Se trata de un hombre adulto que durante su infancia fue amigo Roderick Usher. Al inicio del relato, el narrador llega a la casa de Usher para hacerle compañía; aunque se trata de un sujeto que se presenta como racional, la atmósfera de la mansión y los hechos que transcurren en la casa terminan afectando sus nervios y modifican su forma de ver la realidad. Al final del relato, ante las muertes de Roderick y de Madeline Usher, el narrador abandona la mansión en medio de una terrible tormenta.
Roderick Usher
Se trata del último heredero de los Usher. Roderick vive encerrado en la vieja mansión familiar junto con su hermana, Lady Madeline, y padece de un peculiar trastorno mental que ha deteriorado mucho su calidad de vida. Ante el peligro de la muerte y la sensación de soledad, Usher le escribe una carta al narrador para pedirle compañía. Ya con su amigo de la infancia en la mansión, pasa los días dedicándose al arte (lee, toca la guitarra, dibuja) y a la reflexión. En este tiempo, al narrador le llama mucho la atención las extrañas teorías que su anfitrión desarrolla, especialmente aquellas relacionadas al miedo y a su deplorable estado de salud. Tras la aparente muerte de su hermana, los síntomas de Roderick se agudizan y parecen sumirlo en la locura. Finalmente, cuando su hermana vuelve a aparecer con vida, Usher muere debido al miedo que le causa la aparición.
Lady Madeline
Es la hermana gemela de Roderick Usher. Cuando el narrador llega a la mansión, Lady Madeline agoniza. Poco tiempo después, fallece y es sepultada temporalmente en una cripta por orden de Roderick, quien tiene miedo de enterrarla con vida debido a los síntomas de su extraña aflicción. Al séptimo u octavo día, Madeline escapa del lugar en el que fue enterrada y se hace presente en la sala en la que se encuentran su hermano y el narrador. Con sus últimas energías, Madeline avanza hasta Roderick y se desploma sin vida sobre él. Roderick, como consecuencia del espanto que le produce la situación, muere también.
El sirviente
Se trata del sirviente que recibe al narrador en la entrada de la mansión Usher y se hace cargo de su caballo.
El criado
Este personaje aparece brevemente y conduce al narrador desde el vestíbulo de la casa hasta el gabinete de su amo.
El médico
Se trata del médico de la familia. Su aparición es fugaz: cuando el narrador llega a la mansión, el médico justo se está retirando, por lo que ambos personajes apenas se cruzan. En ese breve encuentro, el narrador llega a percibir un aire de perplejidad en el médico, aunque no logra interpretarlo.
