Ana Frank
Joven holandesa de origen alemán. Es la hija más joven del señor y la señora Frank. Debido a que el diario es su posesión más preciada, los lectores adoptan su punto de vista. En su diario, Ana es precoz, inteligente, encantadora y, hasta en las peores circunstancias, divertida. Durante el transcurso del relato, Ana deja de ser una niña consentida y algo despistada para convertirse en una jovencita de quince años muy consciente de sí misma.
Aunque al comienzo de su diario no tiene consciencia política, Ana llega después a cuestionar el antisemitismo y el objetivo de la guerra. Durante su estadía en el escondite, sufre de aburrimiento y desesperación, además de la irritación de aquellos a su alrededor. Ana también descubre muchas buenas cualidades en sí misma. Luego de que su familia fuera encontrada en su escondite, Ana es enviada al campo de concentración en Belsen, Alemania, donde muere antes de cumplir los dieciséis años.
Margot Frank
La hermana mayor de Ana. Tiene dieciséis años cuando comienza el diario de Ana. Es callada, estudiosa, humilde y siempre está lista para complacer a los adultos, por lo que normalmente se enfrenta con su hermana, más rebelde y platicadora. Muchos la toman como un ejemplo a seguir para Ana. Margot es la primera en ser llamada por la Gestapo en Ámsterdam. Esto obliga a los Frank a esconderse. Margot muere unas semanas antes que Ana en el campo de concentración de Belsen.
La señora Frank
La madre de Ana y Margot Frank. Proviene de una familia rica y ha pasado la mayor parte de su vida en Alemania. En cuanto a sus habilidades como madre, resulta ser un poco decepcionante para Ana, quien preferiría que fuera más afectiva y tolerante. Es una mediadora durante las disputas entre adultos en el escondite. Después de que los residentes son capturados y sus hijas son enviadas al campo de concentración en Belsen, ella muere en Auschwitz.
El señor Otto Frank
El padre de Ana y Margot Frank. Proviene de una familia rica y ha pasado la mayor parte de su vida en Alemania. Cuando Hitler toma el poder en 1933, Frank reacciona llevando a su familia a vivir a Ámsterdam, en los Países Bajos. Es allí donde comienza un negocio de productos alimenticios. Cuando los nazis invaden a los Países Bajos, Otto hace arreglos para que su familia se oculte en el edificio donde alguna vez trabajó (a los judíos no se les permitió trabajar con holandeses no-judíos después de que los nazis invadieran los Países Bajos). Es el pariente favorito de Ana, quien lo llama “Pim” y lo considera su salvador y confidente en el escondite. Él es el único sobreviviente de la guerra de su familia. Estuvo a cargo de la publicación del diario de Ana y murió a comienzos de la década de los ochenta.
El señor Van Daan
Socio del señor Frank. Trabajó formalmente en la industria de las carnes y las salchichas. Se encarga de que su familia viva con los Frank en el anexo de su antiguo establecimiento. Ana lo considera un insufrible sabelotodo, aunque ella reserva la mayor parte de su ira para su esposa. Muere en la cámara de gas en Auschwitz.
La señora Van Daan
La esposa del señor Van Daan. Los Van Daan también son alemanes, y la señora Van Daan es de origen humilde. Es vanidosa y altiva. Ana la considera la persona más insufrible en el escondite, y se molesta cuando coquetea con el señor Frank. Peter Van Daan tiene problemas para hablar con ella, lo que lleva a Ana a pensar que, al igual que a su madre, le hace falta cierta habilidad maternal. Muere en el campo de concentración de Belsen.
Peter Van Daan
Único hijo del señor y la señora Van Daan. Tiene casi dieciséis años cuando entra a vivir en el escondite. Tímido, torpe e introspectivo, nunca llama la atención de Ana hasta que ya han vivido en el escondite por casi dos años. Ellos comienzan una profunda amistad que los conduce a un poco de intimidad física. Al comienzo, Ana está perdidamente enamorada de él, pero después esta se da cuenta de que, aunque es un buen chico, es muy débil y le hace falta carácter. Desaparece durante una marcha forzada con las tropas alemanas.
Alfred Dussel
Dentista anciano que es invitado a vivir con los Van Daan y los Frank en el escondite. Su esposa logró escapar la invasión nazi. Él se queda a dormir en el cuarto de Ana y la vuelve loca con sus raros hábitos nocturnos. Puede ser muy irritante y obstinado. Muere en el campo de concentración de Neuengamme, Alemania.
El señor Kleiman
Socio holandés del señor Frank, quien los ayuda a vivir en el escondite. Les provee con comida y, con mucho esfuerzo, los mantiene en secreto por dos años. Es capturado con los Frank y los Van Daan pero es puesto en libertad debido a sus problemas de salud.
El señor Kugler
Otro socio holandés del señor Frank que los ayuda a vivir en el escondite. Guarda, junto a Kleiman, el secreto de los residentes. Él también es apresado por su participación ayudando a los residentes del escondite. Pasa ocho meses en un campo de trabajo forzado.
Miep
Una mujer holandesa que ayuda a los residentes del anexo con comida, ropa, libros y compañía. Alegremente los ayuda con las cosas que necesitan y les ayuda a celebrar sus festividades. Junto con Bep, ella recupera y guarda el diario de Ana cuando los residentes del escondite son arrestados.
Bep
Una mujer holandesa que hace trabajos y encuentra comida para los residentes del escondite, al igual que también los ayuda a conseguir artículos prohibidos y cupones. Con frecuencia les da a Margot y a Ana trabajo de oficina para distraerlas. Junto con Miep, recupera y guarda el diario de Ana después de que los residentes del escondite son arrestados.
Hanneli
Una amiga de la escuela de Ana. Mientras que está en el escondite, Ana tiene visiones de Hanneli sufriendo en un campo de concentración. Después de ser enviada a Belsen, Ana se encuentra con Hanneli allí, y las dos chicas se alegran de sufrir al menos juntas antes de morir.
Peter Schiff
El chico de la escuela que le gusta a Ana. Ellos estuvieron juntos por varios momentos antes de que Ana se viera obligada a esconderse. Después de dos años después de ocultarse, Ana lo recuerda con anhelo y deseo. Parte de su amor por Peter Van Daan es en realidad amor por Peter Schiff.
Helmuth Silberberg
El novio de Ana cuando ella se ve obligada a esconderse. Es un miembro de la Liga Juvenil Sionista.
