Hércules Poirot
Este detective belga, que luce un característico bigote y una personalidad genial, es un personaje recurrente en las novelas de Agatha Christie. Tiene una capacidad de observación inusualmente aguda, una aguda habilidad para leer las emociones de los demás y una inmensa capacidad lógica. Poirot se presenta a sí mismo como meticuloso y excéntrico, y a pesar de su confianza en el pensamiento tranquilo y profundo, es un intérprete entusiasta. De hecho, después de haber determinado la verdad más probable a través de una cuidadosa reflexión, tiende a comprobar sus propios hechos enfrentándose combativamente a sus sospechosos para observar su reacción. Aunque es el protagonista del libro, su vida interior permanece oculta a los lectores y, de hecho, es un personaje un tanto plano. Su papel consiste sobre todo en servir de guía al lector, poniendo en primer plano las pruebas y presentándolas en un orden comprensible.
El Sr. Ratchett
Ratchett es la víctima de asesinato de la historia. Su verdadera identidad es en realidad la de un gángster estadounidense llamado Cassetti. Al principio de la novela, Ratchett pide a Poirot protección contra sus enemigos.
M. Bouc
M. Bouc es un viejo amigo de Poirot y un compatriota belga. Trabaja para una compañía la cual es propietaria del Orient Express. Es el compañero constante de Poirot, tanto para ayudarle a tomar las riendas del tren cuando es necesario, como para actuar como sustituto del lector. Es Bouc quien pide a Poirot que se encargue del caso del asesinado Sr. Ratchett. Bouc se asombra constantemente de la capacidad de su amigo para resolver misterios.
El Dr. Constantine
Constantine es un médico griego al que llaman para examinar el cadáver de Ratchett. Es también quien junto a Bouc hace compañía a Poirot a lo largo de la novela y cumple la función de punto de identificación para el lector. Es Constantine quien determina que las inusuales heridas de Ratchett fueron provocadas por al menos dos asesinos. También determina la hora de la muerte de Ratchett.
La señora Hubbard
La Sra. Hubbard es una odiosa y neurótica mujer americana que habla incesantemente de su hija, a la que supuestamente acaba de visitar en Turquía. Su testimonio es fundamental para la investigación de Poirot: afirma haber visto a un hombre, presumiblemente el asesino de Ratchett, escondido en su compartimento la noche del asesinato. También afirma haber encontrado una daga ensangrentada escondida en su equipaje. Sin embargo, ambas revelaciones resultan ser falsas o falsificadas, al igual que toda la identidad de la Sra. Hubbard. Resulta que en realidad es Linda Arden, la famosa actriz trágica que fue abuela materna de Daisy Armstrong. Esto hace que su obsesión por su hija (ficticia) sea aún más conmovedora, ya que en realidad está de luto por su hija de la vida real.
Princesa Dragomiroff
Dragomiroff es una anciana aristócrata rusa de la que se rumorea que huyó de su país natal tras la revolución comunista. Es imponente, misteriosa y notablemente fea, pero con unos modales que imponen respeto a todo el mundo, incluido Poirot. Más tarde se descubre que era la madrina de la madre de Daisy Armstrong, una de las víctimas de Ratchett, y que por ese motivo quería matarlo. El misterioso pañuelo encontrado en el compartimento de Ratchett resulta ser de ella, aunque más tarde se revela que esta pista, como la mayoría en el caso, fue colocada para confundir a los detectives.
El coronel Arbuthnot
Arbuthnot es un oficial estereotípicamente inglés que sirve en la India, que en aquella época estaba colonizada por los británicos. Es callado, estoico y un poco esnob. Sus primeras conversaciones con Mary Debenham despiertan las sospechas de Poirot y revelan inadvertidamente que los pasajeros del tren no son los extraños que aparentan ser. Christie insinúa que, a lo largo de la novela, Poirot desarrolla sentimientos románticos hacia Debenham.
Mary Debenham
Debenham, como Arbuthnot, es estereotípicamente británica. Se esfuerza por mostrarse serena y contenida emocionalmente, pero su compostura empieza a resquebrajarse al principio de la novela: Poirot es testigo de su evidente angustia, no sólo en sus conversaciones con Arbuthnot, sino también en su reacción ante el inevitable retraso del tren. Más tarde huye del compartimento llorando durante uno de los interrogatorios de Poirot. Finalmente, Poirot se da cuenta de que trabajaba como institutriz en la casa de los Armstrong.
La condesa Andrenyi
La condesa es una mujer muy tranquila, hermosa y joven, con un aire vagamente extranjero. Su marido es un diplomático húngaro, pero ella afirma, a diferencia de él, no haber visitado nunca los EE.UU. Su coartada se desmorona cuando Poirot observa extrañas marcas en las etiquetas de su equipaje y en su pasaporte: ella, se da cuenta, ha intentado hacer creer que su nombre es Elena en lugar de Helena. En realidad, la condesa es americana y la hermana menor de la madre de Daisy Armstrong, ya fallecida. Una vez revelado esto, sus modales cambian y su mística se desvanece para revelar una personalidad emocionalmente abierta, sensible y vulnerable. A pesar de su estrecha relación con el caso Armstrong, es la única pasajera que no atacó directamente a Ratchett. Más bien, sospecha Poirot, su protector marido le ha apuñalado en su lugar.
Conde Andrenyi
El Conde, mayor que su esposa, es un diplomático húngaro. No está directamente relacionado con Daisy Armstrong, pero es un marido cariñoso y protector de la Condesa, y por ello apuñala a Ratchett en su lugar.
Cyrus Hardman
Al principio, Hardman se comporta como un americano estereotipado, con una personalidad descarada, tosca y demasiado familiar. Aunque esta personalidad nunca desaparece del todo, más tarde revela que en realidad es un detective encubierto de una empresa de Nueva York. Le cuenta a Poirot que Ratchett le había contratado para intentar mantenerse a salvo de varios enemigos. Sin embargo, más tarde se descubre que este personaje también era una mentira: aunque es detective, Hardman nunca fue contratado por Ratchett. Más bien estaba enamorado de la niñera francesa empleada por la familia Armstrong, que más tarde se suicidó.
Greta Ohlsson
Ohlsson, una mujer sueca de edad avanzada, regresa de su trabajo como misionera. Habla muy poco inglés y se muestra muy emocionada durante toda la película, llorando con frecuencia. La verdadera fuente de esta intensa emoción se hace evidente más tarde, cuando Poirot descubre que fue enfermera en la casa de los Armstrong.solo
Hector MacQueen
MacQueen es el joven y simpático secretario americano de Ratchett. A menudo se queja a Poirot de que su jefe solo habla inglés, lo que resulta ser uno de los muchos intentos de engañar y desviar al detective. De hecho, resulta que MacQueen buscó trabajo con Ratchett para que le ayudara a planear su asesinato. Esto se debe a que el padre de MacQueen era fiscal del distrito encargado del caso Armstrong, lo que proporciona a Héctor un conocimiento de primera mano de la angustia de la familia y de la maldad de Ratchett/Cassetti.
Antonio Foscarelli
Un italiano parlanchín del que Bouc sospecha inmediatamente, en parte por su nacionalidad. Más tarde se descubre que Foscarelli era chófer de los Armstrong y que sentía un apego especial por la joven Daisy.
Hildegarde Schmidt
Criada de la princesa Dragomiroff, Schmidt es una alemana amable y modesta. Parece guiada principalmente por la lealtad a su empleadora, mintiendo aparentemente en numerosas ocasiones para proteger a la princesa. Sin embargo, Poirot descubre más tarde que ella también está implicada en el asesinato, ya que fue cocinera en la casa de los Armstrong.
Pierre Michel
Pierre Michel es el conductor del tren en el que transcurre la novela. Bouc da fe de su honradez y durante la mayor parte de la novela se supone que no está implicado en el asesinato. Parece obediente, organizado y servicial. Sin embargo, más tarde se descubre que era el padre de la niñera francesa que se suicidó durante la investigación del caso Armstrong. De hecho, Poirot se entera de que los asesinos de Ratchett eligieron el tren como lugar de su muerte precisamente porque uno de su grupo, Pierre Michel, estaría trabajando en él.
Edward Henry Masterman
Ayudante de cámara de Ratchett, Masterman es un inglés tranquilo muy parecido a Arbuthnot, pero con una personalidad humilde y obediente. Masterman prefiere leer y estar solo a socializar. Sin embargo, más tarde se descubre que tiene vínculos con los Armstrong: Masterman fue sirviente del coronel Armstrong, tanto cuando ambos servían en el ejército como en la casa de los Armstrong. Al igual que MacQueen, buscó empleo con Ratchett específicamente para ayudar a organizar su asesinato.